生物素标记试剂盒使用说明书

产品介绍：

Elabscience生物素标记试剂盒提供了生物素标记所需全部试剂，用于含有氨基（NH₂-）抗体的标记。生物素已经活化，可直接使用，每个试剂盒足以完成3次标记，每次可标记0.2-2mg。试剂盒中包括3个用于抗体标记脱盐的Filtration tube，不用透析，操作简便，熟练操作90min可完成整个标记过程。

产品特点：

1.  试剂全面本试剂盒提供了生物素标记所需全部试剂。

2.  快速整个过程仅需90min。

3.  方便通过Filtration tube即可脱盐，无需透析或者凝胶过滤。

4. 使用灵活既可用于微量标记又可大量标记，每次可标记0.2-2mg。

5.  理想的标记效果已经优化，确定了zui适的标记比例，降低由于过度标

记而失活的可能性。

产品组成：

标记过程需要仪器：

1.  10ul，50ul，200ul，1000ul可调高精度移液器

2.  恒温箱（37℃）

3.  离心机（离心力可达到12,000×g）

储存条件：

本试剂盒未开封前在2-8℃可稳定保存一年

生物素标记反应原理：

NH₂-Reactive Biotin专一的与伯胺反应（N-末端及赖氨酸残基侧链）形成稳定的酰胺键

操作过程：

实验前准备：

1.仔细阅读使用说明书。

2.计算待使用NH₂-Reactive Biotin的量。

3.提前20min从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温（注：不需要用到的NH₂- Reactive Biotin继续放置冰箱中）。

4.溶解NH₂-Reactive Biotin：加入30ulDMF至NH₂-Reactive Biotin瓶中，静置10min，待其充分溶解，此时生物素的浓度为10mM。

操作步骤：（本操作步骤按照1mg的量进行标记）

1.取1mg待标记抗体于Filtration tube中，并加入相应体积的Labeling Buffer，使抗体的终浓度为2mg/ml，12,000 x g离心10min。（注：①Filtration tube的zui大体积为0.5ml②待标记抗体浓度低时，可先超滤离心一次）

2. 加入13.3ul NH₂-Reactive Biotin 和适量Labeling Buffer至上述Filtration tube中，使终体积为0.5ml，并轻轻吹打混匀。放入37℃恒温箱中避光温育30min。12,000 x g离心10min。

3. 加入适量Labeling Buffer至上述Filtration tube中，使终体积为0.5ml，并轻轻吹打混匀，12,000 x g离心10min。

4. 操作3重复一次。

5. 加0.2ml Labeling Buffer至Filtration tube中，轻轻吹打。将滤芯倒转放置于另一个离心管中，6,000 x g离心10min。

6. 收集离心管中的溶液，即为生物素标记的抗体。

注意事项：

1.本试剂盒也可标记其它含有氨基（NH₂-）的抗原、HRP、多肽，具体标记比例根据待标记物中氨基的数量确定。

2.  DMF要密封干燥保存，使用完立即用封口膜封紧。

3.  操作步骤5中，可用Labeling Buffer作为回收标记抗体的缓冲液，也可使用其它任何缓冲液或保护剂。

4.本试剂盒未开封前的有效期为一年，请在有效期内使用。

5.本试剂盒提供的为10KD的Filtration tube，标记抗原或多肽请注意分子量的大小。

6. 在步骤2中，标记其它抗体时，我们应先控制抗体的终浓度为2mg/mL，然后再根据抗体的量计算应加入NH2 - Reactive Biotin的体积。