粒细胞是外周血数量最多的固有免疫细胞,包含中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞三大亚群。粒细胞是天然免疫的核心执行细胞,负责快速清除细菌、真菌等病原体,是机体第一道免疫防线。三种不同粒细胞的分类和功能对比如下表所示:
表1. 粒细胞的分类及功能对比
| 细胞亚群 | 核心定位 | 外周血占比 | 核心生理功能 | 关键病理作用 |
| 中性粒细胞 | 机体第一道抗菌防线,固有免疫核心主力 | 50%-70%(占比最高) | l 快速吞噬、清除细菌/真菌等病原体; | l 过度活化/焦亡释放损伤分子,引发器官炎症损伤; |
| l 释放中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)胞外诱捕网捕获病原体; | l 肿瘤微环境中呈N1抑瘤/N2促瘤双向可塑性; | |||
| l 分泌细胞因子调控炎症启动与消退; | l 释放NETs重塑肿瘤微环境,驱动肿瘤转移、免疫治疗耐药。 | |||
| l 参与皮肤损伤后的组织修复; | ||||
| l 交叉递呈抗原,连接固有免疫与适应性免疫。 | ||||
| 嗜酸性粒细胞 | 抗寄生虫免疫主力,2型炎症核心调控细胞 | 0.5%-5% | l 释放颗粒毒素,杀伤蠕虫/血吸虫等大型寄生虫; | l 过度浸润释放嗜酸性粒细胞胞外诱捕(EETs),驱动气道/皮肤纤维化; |
| l 分泌IL-4/IL-5/IL-13,调控Th2型免疫应答; | l 持续放大2型炎症,加重过敏组织损伤; | |||
| l 维持免疫稳态,抑制过度炎症反应。 | l 异常活化参与自身免疫病组织破坏。 | |||
| 嗜碱性粒细胞 | 速发型过敏反应启动开关,2型免疫上游调控细胞 | 0%-1%(循环占比zui低) | l 受过敏原刺激快速脱颗粒,启动速发型过敏反应; | l 过度脱颗粒释放组胺/白三烯,引发严重过敏休克; |
| l 分泌TSLP/IL-4,驱动Th0向Th2细胞分化,放大2型免疫应答; | l 持续分泌炎症信号,放大慢性过敏性炎症循环。 | |||
| l 辅助参与寄生虫、慢性病毒感染免疫应答。 |
当前粒细胞研究聚焦在中性粒细胞、嗜酸性粒细胞两大核心方向,同时覆盖粒细胞发育与罕见病机制探索等领域。对于中性粒细胞,免疫衰老调控、肿瘤微环境中铁死亡介导的免疫抑制、NCX1靶向干预气道炎症、活体介观成像追踪细胞动态等成果接连突破;对于嗜酸性粒细胞,抗IL-5Rα单抗在重度哮喘中的中国人群循证数据落地,嗜酸性粒细胞胞外诱捕(EETs)作为EGPA炎症-自身免疫-血栓关联关键环节的机制已被明确证实,单细胞组学也为疾病精准分型提供了支撑。
但是,粒细胞研究中面临细胞不纯、亚型混杂、细胞活性差等问题,常常导致实验结果不稳定、重复性差。Elabscience®全新上线两款粒细胞分选试剂盒,全面适配各类高分科研实验场景:其中总粒细胞分选试剂盒可快速富集全谱系粒细胞,适用于粒细胞整体功能分析、代谢调控、组学初筛等整体层面研究;中性粒细胞特异性分选试剂盒可有效剔除嗜酸、嗜碱细胞干扰、分选纯度更高,适配NETs机制探究、免疫代谢、细胞异质性、脓毒症分型、CAR中性粒细胞构建等精细化机制研究。
这两款粒细胞分选试剂盒均采用温和的阴性分选工艺,可保障细胞高纯度、高活性且功能完好,兼容单细胞测序、功能实验、药物筛选、细胞回输等各类下游实验,有效稳定实验数据、提升实验重复性,适配当下主流粒细胞科研热点,助力科研人员高效推进课题、产出高分成果。
该系列产品主要为以下内容:
| 产品编号 | 产品名称 | 规格 | 储存 |
| MIH012N | 人总粒细胞阴性分选试剂盒 | 10/100/200 Assays | 2-8°C |
| MIH013N | 人中性粒细胞阴性分选试剂盒 | 10/100/200 Assays | 2-8°C |
1. 样本无需裂红处理,细胞活性更有保证。
2. 无刺激,分选目的细胞无抗体和磁珠标记,细胞状态不受影响。
3. 纯度高,分选后细胞纯度大于90%。
4. 无需分离柱进行分离。实验耗时短,最快20分钟可完成阴性细胞分选。
5. 可用于新鲜人PBMC样本或冻存PBMC样本。

图1. 人外周血总粒细胞分选前后纯度检测。采集健康人外周血样本,采用1× ACK红细胞裂解液去除红细胞后,经EasySort™ Human Pan-Granulocyte Isolation Kit(MIH012N)分选出总粒细胞,使用Elab Fluor® Violet 450 Anti-Human CD66b[G10F5](E-AB-F1267Q)、APC Anti-Human/Monkey CD16[3G8](E-AB-F1236E)、PE/Cyanine7 Anti-Human CD123[6H6](E-AB-F1117H)、FITC Anti-Human CD203c[NP4D6](E-AB-F1297C)进行流式细胞术分析,正常人外周血样本分选前后的总粒细胞纯度分别为43.3%左右和97.1%左右。(人总粒细胞纯度(中性粒细胞纯度为CD66b+CD16+, 嗜酸性粒细胞为CD66b+CD16-, 嗜碱性粒细胞 CD66-CD123+CD203c+))。

图2. 人外周血中性粒细胞分选前后纯度检测。采集健康人外周血样本,采用1× ACK红细胞裂解液去除红细胞后,经EasySort™ Human Neutrophil Isolation Kit(MIH013N)分选出中性粒细胞,使用Elab Fluor® Violet 450 Anti-Human CD45[HI30](E-AB-F1137Q)、APC Anti-Human CD66b[G10F5](E-AB-F1267E)、PE/Cyanine7 Anti-Human/Monkey CD16[3G8](E-AB-F1236H)染色后分析结果,正常人外周血白细胞样本分选前后的中性粒细胞(CD45+CD66b+CD16+)纯度分别为37.80%和97.91%。
表2. 中性粒细胞和总粒细胞分选试剂盒批间差和批内差质控测试结果
| 中性粒细胞纯度 | 批内差(n=4) | 批间差(n=4) | 总粒细胞纯度 | 批内差(n=3) | 批间差(n=3) |
| n=1 | 96.50% | 98.07% | n=1 | 97.34% | 91.74% |
| n=2 | 96.19% | 98.03% | n=2 | 95.29% | 92.84% |
| n=3 | 96.91% | 97.96% | n=3 | 94.35% | 91.80% |
| n=4 | 96.69% | 97.88% | Mean (%) | 95.66% | 92.13% |
| Mean (%) | 96.57% | 97.99% | SD | 1.53% | 0.62% |
| SD | 0.31% | 0.08% | CV(%) | 1.60% | 0.67% |
| CV(%) | 0.32% | 0.09% |
由表中结果可知,中性粒细胞分选试剂盒和总粒细胞分选试剂盒的批间差和批内差质控均满足CV≦5%。
表3. 中性粒细胞和总粒细胞分选试剂盒稳定性测试结果
| 中性粒细胞分选试剂盒稳定性测试(细胞分选纯度) | 总粒细胞分选试剂盒稳定性测试(细胞分选纯度% | ||||
| 阳性对照 | 37℃热加速14天 | 运输30天 | 阳性对照 | 37℃热加速14天 | 运输30天 |
| 94.04% | 93.26% | 92.64% | 91.53% | 93.17% | 92.06% |
| 92.30% | 92.99% | 91.95% | 93.29% | 92.81% | 92.66% |
| 94.41% | 91.42% | 92.18% | 92.81% | 92.61% | 91.71% |
中性粒细胞分选试剂盒和总粒细胞分选试剂盒均通过37粒热加速稳定性测试和模拟运输30天稳定性测试,测试结果表明试剂盒性能稳定。
表4. 中性粒细胞分选试剂盒滴度测试结果
| 分组 | 未分选 | 1Assay | 0.9Assay | 0.8Assay | 0.7Assay | 0.5Assay |
| CD45+(%) | 88.19% | 98.11% | 98.04% | 98.11% | 98.05% | 98.18% |
| CD16+CD66b+(%) | 44.00% | 96.27% | 96.29% | 95.95% | 95.19% | 93.27% |
| CD45+CD16+CD66b+(%) | 38.80% | 94.41% | 94.40% | 94.14% | 93.33% | 91.57% |
人外周血白细胞调整细胞密度至1 × 108/mL,分别使用1、0.9、0.8、0.7、0.5 Assay分选试剂分选中性粒细胞并检测细胞纯度。由结果可知,该试剂盒具有良好的稀释滴度,在0.5-1 Assay的应用范围内,分选出的细胞纯度介于91%-95%之间。

图3. 中性粒细胞体外活性测试结果。从人外周血白细胞中分选出高纯度的中性粒细胞后,调整细胞密度至1 × 106/mL,加入终浓度为50 nM的PMA激活培养15 min后使用中性粒细胞活化标志物抗体PE Anti-Human CD66b[G10F5](E-AB-F1267D),APC Anti-Human/Monkey CD11b [ICRF44](E-AB-F1146E),FITC Anti-Human CD62L[DREG56](E-AB-F1051C)染色后进行流式分析,结果可见,和竞品S厂家对比,激活培养的中性粒细胞CD66b、CD62L、CD11b相比未激活组均明显上调。
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图4. 多种配套体量的磁力架产品展示。适配更多分选体量的磁力架产品已上线,详情请查询。
其他更多配套辅助试剂上新如下:
| 货号 | 产品名称 |
| MIM009N | 小鼠记忆CD4+T细胞阴性分选试剂盒 |
| E-CK-A172 | EasySort™ 细胞分选缓冲液 |
| EC001 | EasySort™ Seven-5 磁力架 |
| EC002 | EasySort™ Single-5 磁力架 |
| EC003 | EasySort™ Single-10 磁力架 |
| EC004 | EasySort™ Sixteen-5/15 磁力架 |
更多细胞分选相关产品如下:
| 货号 | 产品名称 |
| E-CK-A103 | 人外周血单个核细胞分离液(P 1.077) |
| EC001 | EasySort™ Seven-5 磁力架 |
| MIH001A | 人 CD3/CD28 T 细胞激活磁珠 |
| MIM001A | 小鼠 CD3/CD28 T 细胞激活磁珠 |
| E-CK-A345 | CFSE 细胞分裂示踪试剂盒 |
| MIH001N | EasySort™ 人 CD3+ T 细胞分选试剂盒 |
| MIH002N | EasySort™ 人 CD4+ T 细胞分选试剂盒 |
| MIH003N | EasySort™ 人 CD8+ T 细胞分选试剂盒 |
| MIH004N | EasySort™ 人 B 细胞分选试剂盒 |
| MIM001N | EasySort™ 小鼠 CD3+ T 细胞分选试剂盒 |
| MIM002N | EasySort™ 小鼠 CD4+ T 细胞分选试剂盒 |
| MIM003N | EasySort™ 小鼠 CD8+ T 细胞分选试剂盒 |
| MIM004N | EasySort™ 小鼠 B 细胞分选试剂盒 |
| MIM005N | EasySort™ 小鼠 NK 细胞分选试剂盒 |
| MIH006N | EasySort™ 人初始泛 T 细胞分选试剂盒 |
| MIH007N | EasySort™ 人初始 CD4+ T 细胞分选试剂盒 |
| MIH008N | EasySort™ 人初始 CD8+ T 细胞分选试剂盒 |
| MIM006N | EasySort™ 小鼠泛初始 T 细胞分选试剂盒 |
| MIM007N | EasySort™ 小鼠初始 CD4+ T 细胞分选试剂盒 |
| MIM008N | EasySort™ 小鼠初始 CD8+ T 细胞分选试剂盒 |
| MIH009N | EasySort™ 人记忆性 CD4+ T 细胞分选试剂盒 |
| MIH010N | EasySort™ 人记忆性 CD8+ T 细胞分选试剂盒 |
| MIM009N | EasySort™ 小鼠记忆性 CD4+ T 细胞分选试剂盒 |
以上为本次上新的Elabscience®新品的相关介绍,后续Elabscience®也将继续推出小鼠CD4阳性分选试剂盒。如有相关的细胞分选和体外培养方案的需求,欢迎小伙伴们在评论区或后台留言,小E将及时解答。
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