详细介绍
| 品牌 | 其他品牌 | 货号 | E-EL-0162c |
|---|---|---|---|
| 规格 | 96T | 供货周期 | 现货 |
| 主要用途 | 科研 | 应用领域 | 生物产业 |
用途
该试剂盒用于体外定量检测血清、血浆或其他相关生物液体中TGF-β1浓度。
背景介绍
转化生长因子β1 (TGF-β1)是一种具有强力抗炎特性的多效性细胞因子,由于其参与脂质代谢、高血压和动脉粥样硬化的病理生理进程,被认为是缺血性卒中(IS)炎症反应过程中重要的高危因素。TGF-β1的基因位于19号染色体 (q13.1-13.3),包括7个外显子和6个内含子。TGF-β1蛋白遍布全身,在构成骨架的组织中尤为丰富,在早期发育过程中,骨架由强韧而富有弹性的骨骼和软骨组织构成,TGF-β1可以帮助调节这些组织的形成与发育。TGF-β1还参与了血管的形成,肌肉和脂肪组织的发育,伤口的愈合,免疫系统中的炎症反应进程并能预防肿瘤的生长。
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗TGF-β1抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的TGF-β1会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物su化的抗GF-β1抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗TGF-β1抗体与结合在包被抗体上的TGF-β1结合、生物su与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,TGF-β1浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中TGF-β1的浓度。
反应类型 | 夹心法 |
规格 | 96T |
反应时间 | 3.5h |
反应性 | 通用 |
检测方法 | Colormetric |
检测范围 | 0.16—10 ng/mL |
灵敏度 | 0.10 ng/mL |
样本体积 | 100μL |
样本类型 | 血清、血浆或其他相关生物液体 |
特异性 | 可检测样本中的TGF-β1,且与其它相关蛋白无明显交叉反应 |
重复性 | 板内,板间变异系数均<10% |
样品活化方法
生物样品中的通常以无活性的形式存在,在检测TGF-β1活性前必须进行活化处理。
活化方法如下:
血清、血浆: 280 μL标准品&样品稀释液中加入40 μL样品,混匀,加入40 μL活化试剂1,室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2,混匀后立即检测。
注意:样品被稀释了10倍!
细胞培养上清:20 μL标准品&样品稀释液中加入100 μL样品,混匀,加入40 μL活化试剂1,室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2,混匀后立即检测。
注意:样品被稀释了2倍!
样本值
血清/血浆:本实验对来自健康的人、大小鼠等样本进行了TGF-β1水平检测。
样本类型 | 样本来源 | 样本值范围 | 稀释倍数 |
血清 | 健康人(n=10) | 22.8-46.1 ng/mL | 10 |
血浆 | 健康人(n=10) | 12.7-43.1 ng/mL | 10 |
血清 | 健康小鼠(n=10) | 66.1-82.9 ng/mL | 10 |
血清 | 健康大鼠(n=10) | 35.4-66.5 ng/mL | 10 |
血清 | 健康猪(n=5) | 4.9-10.2 ng/mL | 10 |
血清 | 健康兔(n=5) | 2.9-6.5 ng/mL | 10 |
血清 | 健康犬(n=5) | 34.5-84.2 ng/mL | 10 |
典型数据
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
ng/mL | 10 | 5 | 2.5 | 1.25 | 0.63 | 0.32 | 0.16 | 0 |
OD | 2.515 | 1.645 | 0.988 | 0.506 | 0.271 | 0.183 | 0.111 | 0.057 |
校正OD | 2.458 | 1.588 | 0.931 | 0.449 | 0.214 | 0.126 | 0.054 | - |

精密度
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
批内变异系数 | 批间变异系数 | |||||
样本 | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
数量 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
平均值( MERGEFIELD 单位ng/mL) | 0.41 | 1.07 | 4.96 | 0.47 | 1.25 | 4.24 |
标准差 | 0.02 | 0.05 | 0.22 | 0.03 | 0.06 | 0.2 |
变异系数 (%) | 4.88 | 4.67 | 4.43 | 6.38 | 4.8 | 4.72 |
回收率
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。
样本类型 | 回收率范围 (%) | 平均回收率 (%) |
血清(n=5) | 94-110 | 102 |
血浆(EDTA)(n=5) | 90-102 | 96 |
细胞上清(n=5) | 95-106 | 98 |
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